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TRIzox是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。样品在TRIzox中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。

• 预防RNase污染，应注意以下几方面：
  
  • 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
    
  • 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
    
  • 配制溶液应使用无RNase的水。
    
  • 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
• 提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
  
• 本制品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
  
• 样品用TRIzox匀浆后，如不即刻加入氯仿，置于-70℃下可放置一个月以上。
  
• 保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
  
• 若下游实验对DNA非常敏感，建议用DNase I(不含RNase)(货号：WE0213)对RNA进行处理。

• 各种材料的处理
  
  • 植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzox中迅速研磨，每30～50mg组织加入1mL TRIzox，混匀。
    注意：样品体积一般不要超过TRIzox体积的10%。
    
  • 动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30～50mg组织加入1mL TRIzox，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzox 1mL混匀。
    注意：样品体积一般不要超过TRIzox体积的10%。
    
  • 单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量TRIzox（每10cm2面积需要1mL TRIzox），用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入TRIzox 1mL混匀。
    注意：
    ① 收集细胞数量不要超过1×107。
    ② TRNzol加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRIzox加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
    ③ 收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。
    
  • 细胞悬液：离心收集细胞。每5×10⁶～1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1mL TRIzox。
    注意：
    ① 加入TRIzox前不要洗涤细胞，以免RNA降解。
    ② 一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
    
  • 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRIzox（推荐0.25mL全血加入0.75mL TRIzox），充分振荡混匀。
    
  • 可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12000rpm（~13400×g）离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。
• 样品中加入TRIzox后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
  
• 向以上溶液中加入氯仿，每使用1mL TRIzox加入0.2mL氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2～3分钟。
  
• 4℃ 12000rpm离心15分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在水相中，把水相（约600μL）转移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。
  
• 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置10分钟。
  
• 4℃ 12000rpm离心10分钟，弃上清。
  
• 加入75%乙醇（用无RNase的水配制）洗涤沉淀。每使用1mL TRIzox用1mL 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
  
• 4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。
  注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
  
• 室温放置2～3分钟，晾干。加入30～100μL无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
  注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。